Calculadora del número de copias de ADN
Escribe la cantidad de ácido nucleico y su longitud para saber cuántas moléculas contiene, por ejemplo para preparar una curva patrón de qPCR. O escribe el número de copias que necesitas y obtén la masa. La calculadora usa masas medias de 650 g/mol por par de bases de ADN bicatenario, 330 por base de ADN monocatenario y 340 por base de ARN.
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Cómo usarla
- Elige qué calcular: el número de copias o la masa.
- Elige ADNbc, ADNmc o ARN y escribe la longitud en pares de bases o bases.
- Escribe la cantidad en ng, pg o µg, o el número de copias, y el volumen en el que está.
Fórmula
- Masa molar de la molécula: M = longitud × 650 (ADNbc), × 330 (ADNmc) o × 340 (ARN) g/mol.
- Copias: N = m × N_A ÷ M, con N_A = 6,02214076 × 10²³ mol⁻¹.
- Masa para N copias: m = N × M ÷ N_A. Femtomoles: m ÷ M × 10¹⁵.
Ejemplo
1 ng de un plásmido de 5000 pb: M = 5000 × 650 = 3.250.000 g/mol, así que N = 10⁻⁹ × 6,02214076 × 10²³ ÷ 3,25 × 10⁶ = 185.296.639 copias, o 0,307692 fmol.
Para un patrón de un millón de copias del mismo plásmido hacen falta 10⁶ × 3,25 × 10⁶ ÷ 6,02214076 × 10²³ g = 0,005397 ng, unos 5,4 pg.
Consejos
- Un plásmido lineal y uno circular de la misma longitud tienen la misma masa por copia.
- Mide bien la concentración, mejor con un método fluorimétrico: un error en ng es el mismo error relativo en copias.
- Los números grandes de copias se muestran completos, como 18.248.911.394 para 10 ng de ADN monocatenario de 1000 nt.
Preguntas frecuentes
¿Cómo se calcula el número de copias de ADN?
Copias = masa en gramos × 6,02214076 × 10²³ ÷ (longitud × masa media por par de bases). Para 1 ng de un plásmido de 5000 pb, 1 × 10⁻⁹ × 6,022 × 10²³ ÷ (5000 × 650) ≈ 1,85 × 10⁸ copias.
¿Por qué 650 g/mol por par de bases?
Es la media redondeada habitual para un par de bases de ADN bicatenario. Algunos protocolos usan 660; entonces salen alrededor de un 1,5 % menos copias. Las cadenas sencillas pesan más o menos la mitad: 330 g/mol por base de ADN y 340 de ARN.
¿Cómo preparo una curva patrón de qPCR?
Calcula la masa del patrón más alto, por ejemplo 10⁸ copias en el volumen que cargas, y haz una dilución seriada de diez en diez. La calculadora de diluciones seriadas da los volúmenes de cada tubo.
¿Para qué sirve el campo de volumen?
Si la cantidad está disuelta en un volumen, escríbelo para ver las copias por microlitro. Con 1 µL el resultado coincide con el número de copias; una concentración en ng/µL se puede introducir como cantidad con un volumen de 1 µL.